近年来，细胞增殖一直是生物医学领域的研究热点。细胞增殖是指细胞在周期调控因子的作用下，通过dna复制、rna转录和蛋白质合成等复杂反应而进行的分裂系列过程，其中核dna的复制倍增是整个过程的重要特征。
细胞增殖检测技术广泛应用于分子生物学、肿瘤生物学、药理和药代动力学等研究领域，不仅在研究细胞的基本生物学特征中非常重要，而且是分析细胞状态、研究遗传性状的一种基本方法，可为探讨疾病的发病机制、诊断疾病及治疗疾病提供有价值的资料。
检测细胞增殖的方法目前主要分为代谢活性检测、dna合成检测、细胞增殖相关抗原检测等。此外，还可以检测atp等酶活性、钙离子内流、细胞膜完整性等，每种检测方法都存在各自的优缺点，应根据不同的实验目的，尽量选择准确性高、重复性好的检测方法或将多种检测方法结合，从而客观、全面地反映实验结果。小爱主要介绍代谢活性检测和dna合成检测两种常用的细胞增殖检测方法。
一、代谢活性检测
✦ cck-8试剂盒 abs50003
产品简介：cell counting kit 8简称cck-8试剂盒，是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。
检测原理：cck-8基于水溶性四唑盐wst-8。wst-8在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成橙黄色的甲臜（formazan）染料。甲臜染料能够溶解在组织培养基中，与活细胞数量成正比。通过比色，可以动态地量化活细胞的数量，从而对细胞增殖或药物毒性进行检测本试剂盒通常用于贴壁或悬浮细胞的周期与凋亡检测。如果用于组织，则需要把组织消化成单细胞状态，再进行检测。
产品优势：cck-8溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分，检测快速，毒性非常低，经济实惠。应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。
引用文献：爱必信cck-8试剂盒累计发文59篇，其中“biomimetic immunosuppressive exosomes that inhibit cytokine storms contribute to the alleviation of sepsis”，影响因子（if）高达30.849。
✦ cfse {5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯} abs9106
产品简介：cfse是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，使其成为一种良好的细胞标记物。
检测原理：cfse本身没有颜色和荧光，直至细胞内的酯酶去除其醋酸盐基团，产生能发出明亮荧光的羧基荧光素琥珀酰亚胺酯。琥珀酰亚胺酯与细胞内氨基反应，形成稳定且能用醛固定剂固定的荧光偶联物，被cfse 标记的细胞呈绿色荧光。
产品优势：应用广泛，除了流式细胞仪检测细胞增殖外，还可用荧光酶标板定量活细胞数目，或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。
引用文献：“multifunctional mesoporous silica-coated gold nanorods mediate mild photothermal heating-enhanced gene/immunotherapy for colorectal cancer”，影响因子（if）6.525。
✦ mtt细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 abs50010
产品简介：mtt 法又称mtt比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
检测原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性mtt还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内，mtt结晶形成的量与细胞数成正比，吸光度越大，表示细胞活性越强，说明药物毒性越小。
产品优势：灵敏度高、经济实惠。已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
引用文献：“long noncoding rna meg3 suppresses cell proliferation, migration and invasion, induces apoptosis and paclitaxel-resistance via mir-4513/pbld axis in breast cancer cells”，影响因子（if）3.699。
✦ alamar blue 阿尔玛蓝细胞增殖及毒性检测试剂 abs47047610
产品简介：阿尔玛蓝（alamar blue）是一种细胞活力检测试剂，包含一种具细胞膜渗透性、无毒性且弱蓝色荧光的指示剂刃天青（resazurin）。
检测原理：刃天青是一种氧化还原指示剂，根据细胞代谢还原情况发生颜色变化。氧化态的刃天青呈紫蓝色且基本无荧光，其还原态产物试卤灵（resorufin）转变为粉红色且高度荧光，产生的荧光强度与呼吸活细胞数量呈正比。阿尔玛蓝的颜色变化可通过普通分光光度计检测吸光度变化，检测波长为570nm，参考波长为600nm；阿尔玛蓝的荧光变化可通过荧光光度计检测，激发波长在530~560nm之间，发射波长为590nm。
产品优势：阿尔玛蓝为单一试剂，可连续快速的检测细胞的增殖情况。阿尔玛蓝对细胞无毒无害，不会干扰电子传递链，不会干扰细胞呼吸或功能，也不会影响细胞的抗体合成与分泌等活性。适用于对同一批细胞的增殖情况进行连续观察和更进一步的观察，操作简便且几乎不干扰细胞正常代谢。
二、dna 合成检测
✦ brdu（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）abs811906
产品简介：brdu( bromodeoxyuridine) 是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其胸腺嘧啶环与5位c连接的甲基被溴取代。
检测原理：brdu 可代替胸腺嘧啶在dna合成期（s期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗brdu单克隆抗体，icc染色，显示增殖细胞。
产品优势：目前常用的细胞增殖标记物有4种，brdu、dna polymerase α、pcna 、ki-67等。因组织细胞内无内源性brdu存在，特异性强，所以brdu应用较广。
引用文献：“collagen/heparan sulfate porous scaffolds loaded with neural stem cells improve neurological function in a rat model of traumatic brain injury”，影响因子（if）3.012。
三、常见问题解答（faq）
question
answer
q1：用cck-8试剂盒检测贴壁细胞，要预培养多长时间呢？
a1：根据细胞种类而定，使用需要摸索一下条件。对于贴壁细胞，cck-8的培养时间一般为1-4小时，但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察显色程度。
q2：使用cck-8试剂盒检测细胞增殖情况需要接种细胞的数量是多少？
a2：不同类型细胞的适用情况不同，实验时，建议先用几个孔摸索接种细胞的数量和加入cck-8试剂后的培养时间。
q3：实验如何保证每孔的细胞接种数量相同呢？
a3：接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。
q4：如何根据od值的大小判断细胞的毒性或者增殖情况？
a4：mtt或者cck-8等通过检测活细胞来反映毒性的，od值与对照组比，值下降，说明细胞活力越低，毒性越大或者抑制增殖。
q5：我的细胞培养基里含有酚红，会影响实验结果吗？
a5：含有酚红的培养基不影响cck-8试剂盒对细胞活性的测定。
q6：细胞培养液比较混作，可以用cck-8试剂盒检测吗？会影响实验结果吗？
a6：如果样品为高浑浊度的细胞悬液，建议设定600 nm（或600 nm以上）作为参比波长，扣除参比波长的od值即可。
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